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單核細(xì)胞分離技術(shù)
(一)鐵粉吸附法
1.材料及試劑
(1)鐵粉或羰基鐵粉(Atomergicchemetals)99%的純度,顆粒小于60µm(GoodfellowMetals)。
(2)強磁鐵(馬蹄形)。
(3)一塊小棒狀磁鐵(約1cm長)。
(4)毛細(xì)吸管等。
2.操作方法
(1)稱取一定量的鐵粉,一般為10g,用100ml生理鹽水洗滌4次,去除任何可溶性有毒物質(zhì)。在倒去鹽水時,用強磁鐵吸住鐵粉。
(2)用50ml生理鹽水混懸鐵粉。搖勻后,分裝于10個瓶中,包扎瓶口,121℃滅菌20min,拿出后立即輕輕搖勻,防止鐵粉結(jié)塊,儲藏備用。
(3)臨用前,倒去瓶中的生理鹽水,加入適量的單個核細(xì)胞懸液(3ml~5ml,細(xì)胞總數(shù)為8×107個/瓶)。37℃溫育45min,中間不時晃動,使鐵粉懸浮起來。
(4)加入一塊小磁鐵棒于瓶中,讓其吸住鐵粉以及附著在鐵粉上的細(xì)胞。
(5)倒出懸液,此懸液主要是淋巴細(xì)胞,離心,收集。
(6)在鐵粉瓶內(nèi)倒入一定量的Hank’s液,用力振搖后,以強磁鐵吸附,幾分鐘后,倒出液體。
(7)2000r/min離心液體,管底即為單核細(xì)胞。
(二)玻璃板吸附法
將分離的單個核細(xì)胞傾于無菌潔凈的玻璃平皿內(nèi),置37℃30min~40min,用毛細(xì)吸管輕輕吸取懸液,即為淋巴細(xì)胞。用適量的Hank’s液沖洗平皿,收獲即為單核細(xì)胞懸液
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